怎么保证微生物检测中菌悬液不会制备化验结果的准确

2021-10-15 14:01:12 1435

一、操作步骤

  我们以平时常使用的大肠埃希氏菌为例,其它菌种操作方法类似。

  1.菌种制备:从菌种保存管中吸取适量菌液,转接到新鲜制备的TSB中,在30℃-35℃条件下培养18-24h。

  2.菌液稀释:吸取步骤1培养后的菌液1mL,加入到9mL的pH7.0氯化钠-蛋白质缓冲液中,进行1:10、1:100、1:1000等的稀释。

怎么保证微生物检测中菌悬液不会制备化验结果的准确

  3.平板计数:取稀释好的菌液,一般取3个稀释级,每个稀释级2块90mm平皿,每皿加入1mL菌液,将温度在45℃左右的TSA倾入已经加有1ml菌液的平皿中,轻轻摇匀,静置,待培养基凝固后,置30-35℃培养箱中倒置培养48h。

  4.菌落计数:在培养指定时间后,将平板从培养箱中取出进行菌落计数,以确定符合实验要求的稀释倍数。

二、注意事项

  1.菌种制备:另外也可以使用TSA平皿进行菌种的培养,如果转接的是菌种冻存管中的菌,宜再转接一次,使用第二次转接的菌种。

  2.菌液稀释:吸取菌液时,需要先对菌液进行振荡或吹打混匀。可以不用进行倍比稀释,只要能保证加入到测试样品中的菌的菌落数符合要求即可。

  3.平板计数:吸取菌液时同样需要先将试管中的菌液进行振荡或吹打混匀。

  4.培养基菌落计数:不建议每天都观察结果,因为平板中可能有凝集水, 如果每天观察拿动平板,可能会使凝集水落到菌落上,导致菌会顺着水流到空白地方,影响计数结果;另外如果是霉菌,因为霉菌有孢子,拿动平皿会导致孢子落到平板空白地方,也会影响计数结果。

三、实验思考

  1.菌液的作用

  菌悬液的储存期的要求

  《中国药典》20版和《欧洲药典》8.0版要求菌液若放置在室温,菌悬液必须在2小时内使用,若放置在2-8℃条件下保存,可以在24h内使用。

  可是菌悬液的菌的数量需要在48h后才能确定,但是在24h之内菌悬液又必须使用,所以在不知道菌含量的情况下,样品测试需要做至少三个浓度梯度。

  之前在微生物实验室做了5次的菌悬液制备,为了保证实验的成功,每次都是要做三个梯度,虽然大多数都是同一个稀释级的含量符合要求,但还是会有另一个稀释级符合要求的情况,所以实验员每次都做三个梯度的测试,日常的无菌检查和控制菌检查中没有阳性对照的要求。

  这里说的三个梯度不只是适用于计数法,而是菌悬液实际运用的测试中也需要三个梯度,举个例子,某个无菌产品无菌检查中的阳性对照测试,需要做三个对照。当然,同样的产品方法适用性,培养基的促生长能力也是同法操作,操作过程图如下:

怎么保证微生物检测中菌悬液不会制备化验结果的准确